DNA 提取的核心挑战：为何选择酚-氯仿抽提法？1. 酚-氯仿抽提法的提取步骤样品制备：使生物样品均质以完成细胞裂解。对于细胞，在适当体积的裂解缓冲液中重悬。对于组织，在液氮中研磨，然后在裂解缓冲液中重悬。细胞裂解：在55°C下孵育1-2小时或直到样品完全裂解。必要时在裂解缓冲液中加入蛋白酶K。苯酚-氯仿萃取：在裂解的样品中加入一体积苯酚：氯仿：异戊醇（25:24:1），用手彻底旋转或摇动约20秒。相分离：16000 × g室温离心5分钟，小心地除去上层水相，将层转移到新的管中。确保移液过程中不要携带任何苯酚。进入下面的“乙醇沉淀方案”。Reagent Volume Glycogen (20 μg/μL) 1 μL7.5 M NH4OAc 0.5 × volume of sample100% ethanol 2.5 × (volume of sample +NH4OAc)按上表所列的顺序，将下列试剂加入水相。

将试管置于-20°C过夜，从样品中沉淀DNA。注意：如果您希望继续该方案，请将试管置于干冰或-80°C中至少1小时。

将样品在4℃16000 × g下离心30分钟，使cDNA成球。

小心地除去上清，不要干扰cDNA微球。

加入150 μL 70%乙醇。4°C, 16000 × g，离心2分钟。小心取下上清。

重复步骤3一次。尽可能多地去除剩余的乙醇。

cDNA颗粒在Thermo Scientific SpeedVac浓缩器中干燥2分钟或在室温下干燥5-10分钟。

将cDNA微球悬浮于50-100 μL TE缓冲液或无核酸酶的水中，上下移液30-40次。

使用分光光度法（例如，Nanodrop）或琼脂糖凝胶运行等分液来测量DNA浓度和纯度。

2.酚-氯仿抽提法的优势酚-氯仿抽提法是一种经典的有机溶剂抽提技术，其原理基于不同生物大分子在水相与有机相中的溶解度差异：

酚：有效变性和沉淀蛋白质；氯仿：去除脂类杂质并防止泡沫形成；异戊醇：减少 DNA 损失，提高回收率。该方法适用于多种样本类型（如细胞、组织、血液），尤其适合需要大量 DNA 或对纯度要求较高的实验。

酚氯仿提取法能有效去除核酸中的蛋白质和脂质，从而获得相对纯净的 DNA 样本。该方法利用 DNA、蛋白质和脂质在这些溶剂中的不同溶解性，将 DNA 从其他细胞成分中分离出来。酚用于变性和提取蛋白质，而氯仿用于提取脂质。此方法适用于多种样本类型，包括细胞、组织和某些体液。它既适用于小规模也适用于大规模的 DNA 提取。

3. 酚-氯仿抽提法的局限性尽管酚-氯仿抽提法具有成本优势，但也存在以下问题：

操作复杂：需多次离心、移液，步骤繁琐；安全性风险：酚和氯仿具有毒性，需通风柜操作；耗时较长：从裂解到最终溶解可能需要数小时；重复性差：人为操作误差影响结果一致性。